· poliacrilammidegel deve da monomeru acrilamide, materiale di partenza di polimerizazione, catalyseur, è u dirittu di u mischju di sali è buffer inseme.
· acrilammideè BIS (N, N '- doppiu acrilamide di metilene) hè a matrice di gel monomeru.
· persulfate d'ammoniu principià u prucessu di polimerizazione adesivu.A formulazione di a cola necessita una suluzione di persulfate ammonium 10% preparata in acqua.A maiò parte di l'infurmazioni indicanu un bisognu di usu attivu.Tuttavia, a suluzione 10% pò esse piazzata à 4 ℃ per parechje settimane senza perdita significativa di attività.Fate finu à 10 ml è scacciate quandu a cola ùn riesce à aggregate.
Tip: U percentuale diacrilammidein sequencing glue è proteina cola ùn hè micca listessu.Sè aduprate acrilamide prefabbricata: suluzione BIS, assicuratevi di piglià a buttiglia giusta.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) hè un catalyseur, in una buttiglia marrone, pusatu in a frigorifera.Aghjunghjite ghjustu prima di versà a cola.
· electrophoresis polyacrylamide usatu vetru in electrophoresis deve esse lavatu prima è dopu ogni volta.Dopu l'elettroforesi, lavate cù una spazzola suave è un pappu in acqua saponata calda, risciacquate cù l'acqua distillata è stà à secca.
· umidità è polvera pò causari cù polimeru cavu.Prima di l'elettroforesi, pulite u vetru di vetru cù un detergente per vetru è sguassate cù una spazzola suave.Lavate cù acqua distillata è asciugate bè cù un pappu di carta.Risciacquare cù etanolu à 70% prima di asciugà cù carta aiuta à pulisce è accelerà l'asciugatura.Aghjunghjite campioni di acrilamida successivamente: BIS, acqua, soluzione tampone, persulfate d'ammoniu, TEMED.Agite bè è pour immediatamente.
Ùn hè micca necessariu degass polyacrylamide prima di polimerizazione.(L'acrilamida era usata in un vacuum per sguassà e bolle perchè l'ossigenu impedisce a polimerizazione).
Punti di mostra di punti di cola horizontale.
· mette un pezzu di carta nera in a scatula di fondu, fondo neru per fà qualchì foru di mostra per vede più chjaramente.
· buffer riempitu di cisterna di cola, ghjustu sopra à u colloide.
· se u bordu hà una luce, accende e luci, lasciate chì a luce brilla colloid.Pigliate u campione in a pipetta.
· aduprendu un pipettatore automaticu.
· in 10-200 mu 1 puntu muvimenti liquidu pò ièssiri usatu in a maiò parte di i punti nantu à a mostra.Per i buchi di campioni assai chjuchi (menu di 10μ1), a longa testa di pipette utilizata per a sequenza di cola hè più còmuda.
· pipetta appena immersa in u campione, inalazione di fluidu chì si move lentamente.A mostra pò esse appiccicosa cù a glicerina, è u pumping rapidu pò attirà bolle d'aria in a testa di pipette.
· campioni dopu à inhaling testa pipetting, si move a testa fluidu delicatamente nant'à u bordu di u pipa o carta sguassati succhia testa liquidu fora di i gocce.Attenti à ùn succhià a mostra.
Pone a mostra in a fossa di mostra
· Dispositivo di pipetting per guardà un pocu di prissioni, fate i campioni ligeramente movenu a testa di liquidu overflow.
· a testa di pipetta inserita in u buffer, ligeramente più altu di i buchi spot, mantene a pressione pusitiva.A punta di a pipetta pò esse inserita in un picculu pirtusu.
· lentamente è fermamente i campioni fora.A punta di a pipetta hè posta sopra à u puntu di u puntu di mostra, è a mostra scenderà in u foru.Lasciate a mostra affruntà per riempie u foru di mostra invece di spinghje.
· una volta l'ultima goccia di mostra cù a testa di liquidu, u liquidu si moverà à a seconda gamba, alzà lentamente u muvimentu di liquidu, esce da u buffer
Cumu fà un campionamentu di cola verticale?
· fori di campionu di punta di cola verticale furmati trà dui pezzi di vetru.In una cola assai fina, a testa di pipette ùn pò mancu esse inserita trà dui vetri.Fighjate à a glicerina!Mettite a testa di a pipetta sopra u foru di mostra è a mostra affunderà in u foru.
· puntu campionu nanzu, assicuratevi di mette u puntu verticale di polypropylene acyl gel campionu foru hè lavatu pulito.Lavate l'acrilamide senza polimeru è l'acqua chì pò apparisce à u fondu di u foru di mostra.L'acqua pò fà u foru di mostra significativamente più chjucu.Aduprate una siringa da 25 ml o 50 ml è una agulla di calibre 18.Pour in u buffer di l'elettroforesi è lavate cù cura u foru di mostra.
· pò esse difficiule di vede u pirtusu di mostra, ma à u listessu tempu, u restu hè faciule.Se ci sò buchi eccessivi, u buffer di mostra pò esse pruvatu cù bromophenol blue.
Tempu di post: 31-mar-2023